人间充质干细胞成骨诱导分化培养基

货号：CP1202

产品描述：伟通生物的成骨诱导分化培养基适用于干细胞向成骨细胞诱导分化，本品包含成骨分化所有成分，能有效提高成骨细胞诱导分化效率。另外附送两种成骨细胞染色液，并有详细操作步骤。产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定。

产品组份

作为完全的，即用型的培养基，不需要额外的添加物，各组分不单独销售。

★ 产品用于

仅供研究使用。不适用于人或动物体外诊断与治疗。

使用注意事项：

1.    在配制完全培养基前，请把胎牛血清、干细胞生长添加剂、青霉素-链霉素、干细胞成骨诱导分化液等放到2-8℃冰箱过夜解冻或37℃水浴中直到完全溶解。

2.    在使用完全培养基前，需要把培养基放到37℃恒温水浴中预热20min。

3.    请把配制好的完全培养基放在4℃冰箱避光保存，并尽量在一个月内使用完。

成骨细胞诱导的准备

P₀-P₄代干细胞，针对P₀-P₄代MSC细胞进行成骨诱导分化可以获得更好的诱导效果。

培养箱：5％CO ²，37℃，饱和湿度条件下在空气中

容器：24孔板、96孔板或者6孔板

培养条件：避光贴壁培养;确保适当的气体交换

良好的细胞状态、合适的细胞融合度有助于成骨细胞的形成。

成骨诱导操作步骤：

1.    MSCs按照5×10³/cm²接种于24孔培养板中，在干细胞扩增培养基37℃，5% CO2的无菌培养箱中培养24h~48h，观察MSC的生长状态，直至细胞融合度达到80%，细胞存活率90%以上。吸去培养基，

2.    更换为成骨诱导培养基，每3天更换一次培养基，连续诱导至3~4周。

3.    在经过特定时期的培养后，成骨培养后的细胞至4周时（26-28天）可以被von Kossa染色液染色骨结节鉴定晚期成骨或茜素红S染色（诱导超过21天后，见下面的方法）处理分析，以及可以进行基因表达分析和蛋白检测等。

★Von Kossa’s矿化结节染色法

原理是将矿化基质中的磷酸盐(钙)、碳酸盐(钙)转变为磷酸银、碳酸银，然后用日光、紫外线或强还原剂使其还原为黑色的金属银。本试验染色过程中未作细胞衬染。 

1.    培养皿用PBS冲洗2次，4％多聚甲醛固定5分钟，双蒸水冲洗3次。 

2.    培养皿中加入5％**银溶液1ml，在黑暗中孵育10分钟，将培养板开盖在紫外灯下照射1小时。 

3.    倒出残留的**银溶液，蒸馏水冲洗3遍。 

4.    培养皿中加入5％硫代硫酸钠溶液1ml，中和残留的**银溶液，吸出残液。 

5.    室温下晾干，封固。 

★ 茜素红S染色分析

1. 经过21天或者更长时间的成骨分化培养后，去除培养基，用PBS清洗一次，然后再用4%的甲醛溶液固定细胞30 min，

2. 用PBS清洗2次，再用2%、pH4.2的茜素红S染色2~3min后，用PBS清洗3次，去处残留的染色液，

3. 在光学显微镜下进行显色观察分析。

质量控制

每个批号的诱导分化培养基均将干细胞有效诱导为成骨细胞。产品的整个生产流程均在GMP车间完成，严格按照GMP标准操作。每批产品均有严格的细菌、真菌、内毒素、pH等指标检测。确保产品质量合格。

伟通生物保留旗下技术文档的所有权利，未经伟通生物公司书面允许，本文档任何部分不得转载或用于其他用途。