RNase蛋白抑制剂（RNase inhibitor）是一种大小为 50 kDa左右的酸性糖蛋白，能够特异地与RNase以非共价键结合形成复合体，造成RNase失活，可抑制各种类型RNase (RNase A, B, C)，从而保护RNA的完整度，已被广泛应用于RT-qPCR、mNGS、tNGS等病原检测方法中。
图1.RNase Inhibitor与RNase A结合示意图[1]
（红色：RNase A；蓝色：RNase Inhibitor）
翌圣ZymeEditor™酶改造平台通过对RNase Inhibitor进行改造，获得了兼容性更好的重组猪源RNase Inhibitor: UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)。本产品对各种逆转录酶和聚合酶活性无影响，如搭配翌圣全能型逆转录酶Hifair® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL) (Cat#14604ES)，经验证可广泛应用于RT-PCR/qPCR、RNA-seq、单细胞测序、cDNA克隆和文库构建等多个应用场景。此外，本产品经过翌圣生物UCF.ME®超低残留工艺处理，宿主残留更低，适合对背景菌要求更为严格的应用场景，如病原微生物检测等。
产品特点
- UCF.ME® 超低残留：大肠杆菌DNA残留水平＜0.1 copies/100 U；
- 核酸酶残留低：无核酸外切酶、切口酶、RNase残留；
- 广谱RNase抑制活性：可抑制包括RNase A、RNase B、RNase C等在内的RNase；
- 兼容RT-qPCR应用体系：在投入量为20 U/T时对RT-qPCR检测体系无影响；
- 兼容NGS应用体系：建库产量及宿主DNA残留优于进口品牌。
产品性能
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E.coli基因组DNA残留< 0.1 copies/100 U，显著低于常规版本
对不同批次的UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)基因组DNA残留检测，并与常规Murine RNase inhibitor的宿主残留水平对比，结果显示UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)宿主基因组DNA残留显著低于显著低于常规Murine RNase inhibitor。
图2.UCF.ME® Swine RNase Inhibitor与常规版Murine RNase inhibitor中E.coli基因组残留检测结果对比
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8U/T投入量能有效抑制50ng RNase A
以Total RNA为模板，配制RT-qPCR反应体系，验证UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)消化RNaseA能力，结果表明UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)能有效抑制RNase A。
图3.UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)对RNase抑制能力验证
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兼容RT-qPCR反应体系：在投入量为20 U/T时对RT-qPCR检测体系无影响
以Total RNA为模板，配制RT-qPCR反应体系，验证UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)对RT-qPCR扩增的抑制作用，结果表明UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)在投入量为20 U/T时对RT-qPCR检测体系无影响。
图4.UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)对RT-qPCR抑制作用验证
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兼容NGS应用体系：建库产量及宿主DNA残留优于进口品牌
UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)搭配翌圣全能型逆转录酶Hifair® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL) (Cat#14604ES)应用于RNA建库，建库产量高于进口品牌T*，测序数据质量相当且宿主DNA残留更低。
图5.14675ES搭配14604ES应用于RNA-seq建库产量
图6.14675ES搭配14604ES应用于RNA-seq测序质量
参考文献
Kobe, Bostjan, and Johann Deisenhofer. "Mechanism of ribonuclease inhibition by ribonuclease inhibitor protein based on the crystal structure of its complex with ribonuclease A." Journal of molecular biology 264.5 (1996): 1028-1043.
翌圣ZymeEditor™酶改造定制服务
ZymeEditor™是一个创新型酶改造底层技术平台，该平台将理性设计技术与定向进化技术有机结合、交互筛选，为创新开发高端酶奠定了技术基础，以满足客户对酶不断升级的应用需求。目前该平台已完成130余种高端酶的改造，具备扎实的酶改造技术基础，为此，ZymeEditor™平台对外开放了酶改造定制服务。若您有酶改造或生产的需求，快扫描下方二维码联系我们吧！
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