产品基本信息

产品名称：Portelite 荧光法RNA定量试剂盒

英文名称：Portelite™ Fluorimetric RNA Quantitation Kit*Optimized for Cytocite™ and Qubit™ Fluorometers*

产品货号：17658   17659

产品规格：100 Tests  500 Tests

储存条件：保存在冰箱-15℃干燥

保质期：12个月

检测和定量少量 RNA 对于各种生物学应用极为重要，例如在进行 Northern 印迹分析、S1 核酸酶测定、RNase 保护测定、cDNA 文库制备、逆转录之前测量体外转录 RNA 的产量和测量 RNA 浓度PCR、差异显示PCR。测量核酸浓度常用的技术是测定 260 nm 处的吸光度。基于吸光度的方法受到蛋白质、游离核苷酸和其他紫外线吸收化合物引起的干扰的限制。使用敏感且选择性的荧光核酸染色剂可以缓解这种干扰问题。 StrandBrite™ RNA 定量试剂是一种超灵敏荧光核酸染色剂，用于定量溶液中的 RNA。 StrandBrite™ RNA 定量试剂可使用 CytoCite™ 或 Qubit™ 荧光计检测低至 5 ng/mL 的 RNA。我们的 StrandBrite™ Green 荧光 RNA 定量试剂盒包括我们的 StrandBrite™ Green 核酸染色剂和优化且稳定的实验方案。它提供了一种定量溶液中 RNA 的便捷方法。

产品光谱图

激发(纳米)：509

发射(纳米)：527

成分

实验方案

样品分析方案

概述

准备 StrandBrite RNA 工作溶液

将 190 µL StrandBrite™ RNA 工作溶液添加到每个 0.2 mL PCR 管中

将 10 µL RNA 标准品或测试样品添加到每个管中

室温孵育2分钟

使用 CytoCite™ 或 Qubit™ 荧光计检测荧光

注：在开始实验之前，将所有套件组件置于室温下。 

溶液配制

StrandBrite™ RNA 工作溶液

将 StrandBrite Green（组分 A）在测定缓冲液（组分 B）中稀释 200 倍。例如，要为 8 个样品准备足够的工作溶液，请将 5 µL StrandBrite Green（组分 A）添加到 1 mL 测定缓冲液（组分 B）中。

注意 用箔纸覆盖工作溶液或将其置于黑暗处，以避光。我们建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备该溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。为了获得最佳效果，该溶液应在制备后几小时内使用。

实验方案

可接受的样品体积范围为 1~20 µL，具体取决于 RNA 样品的估计浓度。推荐样品体积为 10 µL，RNA 浓度在 0.01~10 ng/µL 范围内。如果使用其他样品体积，请调整浓度计算中的稀释系数。

以下实验方案是基于 10 µL 样品体积、RNA 浓度在 0.01~10 ng/µL 范围内生成的。

1.将 190 µL StrandBrite Green 工作溶液添加到每个 CytoCite 样品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。 注意 使用薄壁聚丙烯透明 0.2 mL PCR 管，例如#CCT100。

2.将 10 µL RNA 标准品 #1 和 #2 或测试样品添加到每个管中，然后通过涡旋 2~3 秒进行混合。

3.将所有管在室温下孵育 2 分钟。

4.将样品插入 CytoCite™ 或 Quibit™ 并用绿色荧光通道检测荧光。请遵循适用于 CytoCite™ 荧光计的程序。

标准校准曲线的制备（可选）

对于 StrandBrite™ 检测，您可以选择使用 RNA 标准品制作校准曲线。以下是生成定制 RNA 标准曲线的简要方案：

1.使用 Assay Buffer 进行 1/3 系列稀释，使用 RNA Standard #2 获得 10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01 和 0 ng/μL RNA 标准稀释液。

2.将 190 µL StrandBrite™ Green 工作溶液添加到每个管中。

3.将 10 µL RNA 标准品或测试样品加入每个管中，然后涡旋 2~3 秒进行混合。

4.将反应物在室温下孵育 2 分钟。

5.将样品插入 CytoCite™ 并用绿色荧光通道检测荧光。

产品实验图

图1。用 StrandBriteTM 绿色荧光 RNA 定量试剂盒生成 RNA 标准曲线。用绿色荧光通道定量荧光强度，用线性拟合法计算回归模型。