百萤 钙蓝素AM,细胞渗透型钙黄绿素-分析方法-资讯-生物在线

百萤 钙蓝素AM,细胞渗透型钙黄绿素

作者:西安百萤生物科技有限公司 2023-05-11T00:00 (访问量:2513)

 钙蓝素,AM是美国AAT Bioquest生产的细胞渗透性钙黄绿素,它是钙黄绿素的细胞渗透型。进入活细胞后,弱荧光钙黄绿素AM被水解成钙黄绿素,其激发/发射大值与DAPI,Hoechst和AMCA相似。与典型的绿色和红色荧光团(如FITC,TMR和德克萨斯红)的这种特殊光谱分离为多路复用实验提供了额外的选择。因为钙黄绿素AM本身是荧光的,所以可能需要适当的过滤器组和额外的洗涤步骤以使背景荧光小化。我们的钙测定缓冲液可用于有效洗涤细胞外钙黄绿素。

1. 百萤 钙蓝素AM 参数:

E x(nm)       354

E m(nm)       441

       465.41

           DMSO

存储条件        在零下15度以下保存,避免光照

 C A S        168482-84-6

 

2. 百萤 钙蓝素AM适用仪器

 

流式细胞仪

Ex:     350nm or 405nm

Em:     450/40 nm

通道:   Pacific Blue通道

 

荧光显微镜

Ex:     DAPI滤波片组

Em:      DAPI滤波片组

推荐孔板:   黑色透明底板

 

荧光酶标仪

Ex:          360nm

Em:          450 nm

Cutoff:      420nm

推荐孔板:    黑色透明底板

读取模式:    底读模式 

3. 百萤 钙蓝素AM实验方案

操作步骤

(1)准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2)在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Calcein Blue,AM * CAS 168482-84-6 *储备液。
2.1卡介素蓝量,AM * CAS 168482-84-6 *使用量:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg钙黄绿素,AM * CAS 168482-84-6 *与1074.32μL无水DMSO混合。
 3用含有10μM钙黄绿素的HHBS制备2X工作溶液,AM * CAS 168482-84-6 * 4,0.08%Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1Calcein Blue的终孔内浓度,AM * CAS 168482-84-6 *:5μM
3.2Pluronic®F-127的终孔内浓度:0.04%
3.3终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中混合16μL钙黄绿素,AM * CAS 168482-84-6 *,25.6μL10%Pluronic®F-127和256μL25mM Probenecid。然后,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议终浓度为Calcein Blue,AM * CAS 168482-84-6 *为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 4100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1此步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的终浓度调整为以下:5μM钙黄绿素,AM * CAS 168482-84-6 *,0.04%Pluronic®F-127,1 mM丙磺舒。

 5孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-60分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 61.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL。
 7HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
 8运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2Ex / Em = 360/445 nm运行实验。

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