基本信息
货号：22204
储存条件：-20℃避光干燥
保质期：自收到起6个月
简介
尽管JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差使得它在某些应用中难以使用。即使在1μM浓度下，JC-1也倾向于在水性缓冲液中沉淀。当需要高染料浓度时，JC-10已被开发为JC-1的替代物。与JC-1相比，我们的JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能够选择性地进入线粒体，并随着膜电位的增加可逆地将其颜色从绿色变为橙色。这种性质是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成导致发射光从520nm（即JC-10单体形式的发射）转变为570nm（即J-聚集体形式的发射）。当在490nm激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-10的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。除了用于流式细胞仪外，JC-10还可用于荧光成像。我们已经开发出一种在荧光微孔板平台中使用JC-10的方案。在一些细胞系中，JC-10具有甚至优于JC-1的性能。
物理化学特性
分子量：~600
储存方式：DMSO
Ex=515nm
Em=529和527nm
JC-10的分析方案
简要概括
准备含有测试化合物的细胞®
添加JC-10工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）®
在室温或37 ℃孵育1小时®
在Ex读取荧光强度 / Em = 490 / 525nm和540 / 590nm
注意：以下是我们推荐的活细胞方案。 该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。
操作步骤
1. 准备JC-10工作溶液：
1.1每瓶DMSO原液（100μL，2 mg / mL，3 mM）只能使用一次。任何未使用的小瓶应储存在<-20℃。注意：避免反复冻融循环，并避光.
1.2准备1X JC-10工作溶液：在实验当天，解冻一份JC-10 stockolution到室温。在Hanks和20 mM Hepesbuffer（HHBS）或您选择的缓冲液（pH 7-8，含0.02％Pluronic [表情] F-127）中制备10至30μM1X工作溶液。通过votexing将它们混合均匀。注意：对于某些细胞系，pH值为8的工作溶液可能会阻止JC-10泄漏。
2.用荧光酶标仪进行JC-10检测：
2.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。
2.2将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-10工作溶液（来自步骤1.2）加入到细胞板中。
2.3将JC-10加载板在37 oC，5％CO2培养箱中孵育15-60分钟。
注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
2.4监测Ex / Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/590 nm（TRITC通道）的荧光变化，进行比率分析。
可选：从板上取下JC-10工作溶液; 在分析之前，将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。
3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-10检测：
3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。
3.2离心细胞，每管取1-5×105个细胞。
3.3将细胞重悬于500μLJC-10工作溶液中（来自步骤1.2）。
3.4在室温或37°C，5％CO2培养箱中孵育10至30分钟，避光。
注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
3.5使用荧光显微镜（使用FITC和TRITC过滤器）或流式细胞仪（使用FL1和FL2通道）监测Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm处的荧光变化。可选：移除JC-10工作 从板上解决; 在荧光显微镜下分析之前，将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。