6 酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书-分析方法-资讯-生物在线

6 酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书

作者:上海恒斐生物科技有限公司 2015-05-04T00:00 (访问量:2167)

 检测原理: 本试剂盒采用竞争ELISA法。用6-keto-PGF1a抗原包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的6-keto-PGF1a与包被的6-keto-PGF1a竞争生物素标记的抗6-keto-PGF1a单抗上的结合位点,游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素,生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,6-keto-PGF1a浓度与OD450值之间呈反比,通过绘制标准曲线计算出样品中6-keto-PGF1a的浓度。

样品收集:

1. 血清:全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。

2. 血浆:抗凝剂推荐使用EDTA-Na2,样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂样品。

3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4. 细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

5. 其它生物样品:1000×g离心20分钟,取上清即可检测

具体处理方法可参考:

6. 样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。

7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融。

8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议先做预实验,以确定稀释倍数)。

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