Hoechst 33342 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。常用于细 胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也用于普通的细胞核染色，或常 规的 DNA 染色。Hoechst-DNA 的激发和发射波长分别 350nm 和 460nm。

    本 Hoechst 33342 染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染 色。 

使用方法 

1.对于固定的细胞或组织

    a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色， 则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33342 染色。如果不需要进 行其它染色，则直接进行后续的 Hoechst 33342 染色。 

    b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33342 染色液，覆盖住样品即可。对于悬 浮细胞，至少加入待染色样品体积 3 倍的染色液，混匀。室温放置 3-5 分钟。 

    c. 吸除 Hoechst 33342 染色液，用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次，每次 3-5 分钟。 

    d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细 胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。 

2. 对于活细胞或组织： 

    a. 加入适当量 Hoechst 33342 染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一 个孔需加入 1ml 染色液，对于 96 孔板一个孔需加入 100 微升染色液。 

    b. 在适宜于细胞培养的温度培养 20-30 分钟。弃染色液，用 PBS 或培养液洗涤 2-3 次即可 进行荧光检测。 

注意事项： 

    1、荧光染料易淬灭，建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。 

    2、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液（HZ1840） 3、 Hoechst 33258 对人体有害，请注意适当防护。请穿实验服并戴一次性手套操作。