核酸外切酶 III

产品及特点

Exonuclease III（核酸外切酶 III）具有从双链DNA的3′-OH末端降解生成5’-单核苷酸的3′→5′外切酶活性。本酶对双链DNA具有高度特异性，能降解平滑末端、3′凹陷末端及有切口的DNA，但是不能降解3′-突出末端。所以，可以用产生不同末端的限制酶通过双重降解（Double digestion）后，利用Exonuclease III的3′→5′的外切酶活性，从一端降解，得到互补的单链DNA和5′-P单核苷酸。与核酸酶相比，本酶的碱基特异性较小，如在富含GC的位置上，由于反应停止的机率较低，可用于DNA的Deletion制作。其作用原理图如下：

本产品主要用途：

1. 通过部分降解双链DN**段，产生一部分单链DN**段，作DNA聚合酶的底物（生成的DNA可用于双脱氧法序列分析）。

2. 与单链特异性核酸酶（S1 Nuclease或Mung Bean Nuclease）合用制作DNA缺失片段。本酶对双链结构DNA具有高度特异性，对于双酶切DN**段（例如Eco R I-Pst I Fragment）能制作单向（Eco R I方向）缺失的DNA。

3. DNA-蛋白质相互作用分析。

活性单位定义

以限制酶处理的小牛胸腺DNA为底物，在37℃、pH8.0的条件下，30分钟内产生1 nmol酸可溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

纯度

1. 50 U的本酶和1 μg的Closed circular（RF I）pBR322 DNA在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

2. 50 U的本酶和1 μg的pBR322-Pst I分解物在37℃下反应30分钟，DNA的电泳谱带不发生变化。

Buffer成分

储存Buffer:Tris-HCl（pH8.0） 25 mM，KCl 50 mM，DTT 0.5 mM，Glycerol 50 % 。反应Buffer，10×：Tris-HCl（pH8.0） 500 mM，MgCl2 50mM，DTT 10 mM。